생화학실험 (단백질 분리에서 Dialysis)
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생화학실험 (단백질 분리에서 Dialysis)

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Date : 2007. 05. 21~22
Subject : Dialysis
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□목적
셀로판막․콜로디온막․황산지및 소의 방광막이나 물고기의 부레 등 동물막은 마치 체와 같이 저분자나 이온은 자유로이 통과시키지만, 콜로이드입자나 고분자는 통과시키지 않는다. 이들 반투막으로 콜로이드․고분자용액을 싸고, 이것을 순수(純水) 또는 다량의 용매 속에 담가 두면 저분자나 이온으로 섞여 있는 불순물은 차차 막 밖으로 확산해서 콜로이드․고분자용액을 정제할 수가 있다. 이 방법을 투석이라고 한다. 투석작용은 반투막의 체효과와 확산속도의 차이에 의한 것으로, 콜로이드입자나 고분자의 확산속도가 용질의 확산속도보다 매우 느린 데에 그 원인이 있다. 투석은 정수를 비롯하여 녹말의 정제, 효소의 정제, 혈정(血精)이나 왁친의 정제 등 아주 널리 이용된다.
□재료
-10mM Tris-cl PH 7.0 , 0.1M Tris-cl PH 8.0 , 10mM Citrate PH 6.0 , NAOH , 실, PH 측정기 , 증류수 , 교반기 , 마그네틱바 , 튜브봉지 , 비커
※실험 방법시 주의사항
- 약을 만드는 과정에서 PH가 낮으면 NAOH를 넣어주어 PH를 높여주고 PH가 높으면 HCL을 넣어주어 PH를 낮여준다.
- 아이스에 보관한 샘플 시료를 튜브 봉지에 옮겨 담는 과정에서 실을 이용해 양옆을 묶게 되는데 이때 튜브를 지그제그로 모아서 실로 단단히 고정시켜야 한다.
그렇지 않으면 용액이 세는 경우가 발생한다.
- 묶은 실은 반드시 짧게 정리를 해주어야 한다, 그렇지 않으면 실끼리 서로 엉켜 튜브 봉 지에서 풀려버리게 된다.
- 샘플 시료가 든 튜브 봉지는 다시 Citrate나 Tris-cl 용액에 24시간 담궈 두게 되는데 이 때 이번 실험에서는 4L의 큰 비커가 한 개 밖에 없어서 나머지는 2L비커를 이용하여서 12시간 돌리고 시간이 지난후에 새로운 용액 2L를 교체해서 12시간 동안 돌린다.
□방법
10mM Tris-cl PH 7.0 , 0.1M Tris-cl PH 8.0 , 10mM Citrate PH 6.0을 준비했다
EX) 10mM Citrate PH 6.0를 만드는 과정
4L= Citrate 7.68g을 증류수 3.9L에 넣었다.
마그네틱바를 이용해 섞어 주었다.
여기서 PH 6.0을 맞추기 위해 NAOH를 투여 하면서 PH를 측정하였다. 증류수를 4L에 조금 못미치게 한후에 녹인후에 나머지 모지라는 양만큼 증류수를 더 첨가한다. 이유는 녹으면서 양이 더 늘어날 수가 있기 때문이다.




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